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Denominación del Curso: CULTIVO-DE-CELULAS-Y-SUS-APLICACIONES-A-LA-INMUNOLOGIA-CELULAR

Categorización: Perfeccionamiento

Fecha de Inicio: 06-07-2018

Responsables:

Dr. Roberto Carlos DAVICINO

Dr. Ricardo Javier ELIÇABE

Coordinador:

Dra. María Silvia DI GENARO

Descripción:

DESTINATARIOS Y REQUISITOS DE INSCRIPCIÓN: Egresados con título de grado universitario de 4 años o más en formación biológica (Bioquímicos, Lic. en Biología Molecular, Biólogo, Médicos, Médicos veterinarios, etc.) en disciplinas afines a la temática del curso y alumnos de los doctorados en Bioquímica y Biología de la Facultad.

CUPO: 20 personas.

PROCESO DE ADMISIÓN: Los alumnos interesados realizarán su inscripción enviando un e-mail a la Coordinadora del curso, fundamentando su interés en el curso. La admisión será evaluada en base al cumplimiento de los requisitos especificados y la fundamentación presentada. Luego de aceptada su inscripción, el alumno realizará su inscripción on line en Posgrado de la UNSL

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES:

Módulo I 

Viernes 6/07/18  de 8-18 h.

8-10hs

Diseño y equipamiento para el laboratorio de cultivo de células.

Infraestructura y equipamiento mínimo. Niveles de seguridad. Tipos de cabinas de flujo laminar, estufas, autoclave, materiales y reactivos generales de uso común en el cultivo celular. Trabajo en condiciones asépticas. Métodos de esterilización y desinfección. Controles de esterilización. Normas de Bioseguridad. Buenas prácticas de laboratorio. Contaminaciones más frecuentes. Métodos de detección y monitoreo continuo. Conductas y procedimientos de prevención. A cargo del Bq. Juan Silva

10-13h.

Tipos de células y características de los cultivos: Ciclo celular. Viabilidad celular. Requerimientos para el cultivo celular: superficies aptas para el cultivo, medios de cultivo, suplementos y aditivos, constitución de la fase gaseosa y temperatura de incubación. Células adherentes y de células en suspensión. Concepto de Diferenciación y Transformación. Observación al microscopio. A cargo de Dra. Silvia Di Genaro

Actividad Práctica I (14-18hs)

Familiarización con el laboratorio de cultivo celular y las buenas prácticas de laboratorio de cultivo. Aplicación de las normas de bioseguridad. Manejo en la cabina de cultivo, pipeteo, organización del espacio, desecho de residuos. Preparación. A cargo del Dr. Javier Elicabe y el Bqco. Juan Silva

Sábado 07/07/18 de 08:00 -18:00 h.

8-10hs. Cultivos primarios de células del sistema inmune

Cultivo de linfocitos, macrófagos, etc. Obtención y selección de diferentes tipos celulares en el laboratorio de Inmunología celular. A cargo del Dr. Roberto Davicino

10-13hs. Cultivos de líneas celulares.

Manipulación, repiques y amplificación. Conservación, congelamiento y descongelamiento de líneas celulares. Sistemas de detección de contaminación en cultivo celular. Detección de contaminación por Mycoplasma. A cargo de la Dra. Silvia Di Genaro.

Actividad Práctica I (14-18hs)

Preparación de medios de cultivo. A cargo del Dr. Javier Elicabe y el Bqco. Juan Silva

Módulo II

Viernes 03/08/18 de 08:00 a 18:00 h.

8-10hs. Técnicas para la evaluación de la inmunidad mediada por células: Viabilidad y determinación de mediadores secretados.

Diferentes ensayos para determinar la viabilidad celular (Azul de Tripán, bromuro de 3 (4,5dimetiltiazol2il) 2,5 difenil tetrazolio (MTT), etc.). Recuento y siembra de células. Ensayo de viabilidad utilizando  MTT. Ensayos de citotoxicidad. Métodos para la determinación de apoptosis y necrosis celular. Determinación de la secreción de citocinas y otros mediadores inflamatorios (ON, ROS) en sobrenadantes de cultivo. A cargo del Dr. Roberto Davicino

10-13hs. Técnicas para la evaluación de la inmunidad mediada por células: Ensayos de estimulación y proliferación.

Ensayo de estimulación con Concanavalina A (Con A). Diferentes métodos para evaluar proliferación celular utilizando radioactivos, colorantes visibles y colorantes fluorescentes. Aplicaciones. A Cargo de la Dr. Javier Eliçabe

Actividad Práctica II (14-18hs)

Obtención de macrófagos peritoneales y esplenocitos de ratón. Técnicas de recuento celular y estimación de la viabilidad celular. Observación de células al microscopio.  Estimulación de células con LPS o con zimozan opsonizado para la determinación de mediadores inflamatorios (ON, ROS) por métodos colorimétricos. Ensayo de proliferación celular: observación de blastos al microscopio, cuantificación y procesamiento de los resultados. Determinación de  viabilidad metabólica utilizando el ensayo del MTT. A cargo del Dr. Javier Eliçabe y el Bqco. Juan Silva.

Sábado 04/08/18 de 08:00 a 18:00 hs.

8-13hs. Métodos de purificación y enriquecimiento de poblaciones celulares.

Purificación por gradiente de densidad, por perlar magnéticas, por citometría de flujo, etc. ELISPOT.  A cargo del Dr. Roberto Davicino

Actividad Práctica III (14-18hs)

Análisis de los resultados obtenidos de los ensayos colorimétricos. A cargo del Dr. Roberto Davicino

LUGAR DE DICTADO: Cátedra de Inmunología-Área Microbiología-Departamento de Bioquímica y Ciencias Biológicas-Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. UNSL

ARANCEL GENERAL: $2000 (pesos dos mil).

BECA AL DOCENTE DE LA UNSL: se realizará un 50 % de descuento por lo que el arancel final sería de $ 1000 (pesos un mil)

BECA AL ALUMNO DE LA UNSL: se realizará un 50 % de descuento para los Becarios del área Microbiología – UNSL

OTRAS BECAS: se realizará un descuento del 100 % a los docentes de la cátedra de Inmunología de la UNSL sin cargo.

OBJETIVO:

Objetivo General: Actualizar a profesionales y colegas en los avances en la Inmunología celular.

Objetivos Específicos:

1. Introducir a los alumnos en los fundamentos teóricos y prácticos de las técnicas de cultivo de células eucariotas y de la biología de la célula en cultivo.

2.Analizar los procedimientos básicos a seguir para la realización de metodologías orientadas a la evaluación de la inmunidad mediada por células.

3.    Conocer las nuevas metodologías desarrolladas para el estudio de la respuesta de células de la inmunidad innata y adaptativa.

Informes: sdigena@unsl.edu.ar

Resolución de Protocolización: